2.5 掃描電鏡分析
如圖2所示，干貝堿酶組多糖放大200倍時，多糖的蛋對抗的影呈不規(guī)則塊狀，白質(zhì)且有碎屑狀粗多糖散落，脫除疏松多孔；放大粗糙面至1000倍時，氧化表面凹凸不平，活性散布致密圓形孔徑；10000倍下，干貝多糖表面略粗糙，多糖的蛋對抗的影有裂紋。白質(zhì)稀堿組多糖放大至200倍時，脫除呈大小不一的氧化不規(guī)則片狀，表面光滑；1000倍下，活性多糖切面平整；10000倍時，干貝多糖表面稍有網(wǎng)形凸起和凹陷，多糖的蛋對抗的影棱角清晰。白質(zhì)TCA組多糖放大至200倍，呈大小、形狀不一的塊狀；1000倍條件下，多糖碎片上有條形溝紋和孔洞；放大至10000倍時，觀察到孔洞深淺不一，比較光滑，并呈直線排列于溝紋凹陷中。GDL組多糖存200倍條件下，呈不規(guī)則片狀；放大粗糙面至1000倍下，多糖表面有裂紋，不平整，有大小不一的圓孔；10000倍條件下，觀察到圓孔內(nèi)粗糙不平整，有疏散的細孔。由圖2可知，稀堿組多糖較光滑致密，分子排列較整齊，說明稀堿組多糖分子間相互作用較強，其余3組多糖較疏松，多孔。所有多糖分子間隙均較大，可能是干貝柱多糖分子問的斥力導致分子之間有一定的距離。
2.6 體外抗氧化能力分析
如圖3所示，未脫蛋白的DAMP與4種蛋白質(zhì)脫除方式得到的十貝多糖均有一定清除DPPH自由基的能力，但除了GDL組多糖，其他組多糖的DPPH自由基清除能力都不及VC。經(jīng)GDL法純化的多糖顯示出明顯的DPPH自由基清除能力，并呈劑量依賴關(guān)系。當多糖質(zhì)量濃度為10mg/mL時，GDL組多糖的DPPH自由基清除率為80.56％。不同蛋白脫除方式對干貝多糖清除羥基自由基能力的影響見圖4，稀堿組多糖顯示出明顯的羥基自由基清除能力，并呈劑量依賴關(guān)系。當多糖質(zhì)量濃度為10mg/mL時，稀堿組多糖的羥基自由基清除率為93.64％，比較接近VC的清除能力(10mg/mL，99.73％)。堿酶組及GDL組多糖的羥基自由基清除能力優(yōu)于TCA組多糖，可見，干貝多糖的抗氧化活性與多糖含量并不相關(guān)，而是與單糖組成、空間構(gòu)象等諸多因素有關(guān)。
DAMP的抗氧化活性不高，可能是貝柱干燥過程中，水分的蒸發(fā)使水分子與貝柱多糖中的分子間氫鍵斷裂。引起多糖空問結(jié)構(gòu)的破壞，進而影響抗氧化活性。TCA組多糖對DPPH自由基及羥基自由基的清除能力均不理想，可能存TCA法脫蛋白質(zhì)過程中，糖苷鍵在酸性條件下斷裂，造成多糖含量檢測偏高但活性較低。豐富的氨基酸與生理活性有緊密的聯(lián)系，總氨基酸含量與抗氧化活性呈正相關(guān)，TCA組多糖總氨基酸含量不高，這與體外抗氧化試驗結(jié)果一致。稀堿組多糖表現(xiàn)出良好的羥基自由基清除能力，但DPPH自由基清除能力最弱，可見不同抗氧化活性與干貝多糖結(jié)構(gòu)關(guān)系的聯(lián)系不盡相同。可能由于稀堿組多糖中的基團容易提供質(zhì)子氫與羥基自由基反應(yīng)。稀堿組多糖含有較多的Asp和Glu，Asp和Glu具有抗氧化能力，因此推測稀堿組多糖較強的羥基自南基清除能力可能也與其含有的氨基酸有關(guān)。GDL組多糖中，疏水性氨基酸、極性氨基酸與非極性氨基酸含量較高，葛曉鳴等研究發(fā)現(xiàn)，疏水性氨基酸在DPPH自由基的清除中起到?jīng)Q定性的作用，而極性氨基酸和非極性氨基酸可通過協(xié)同作用促進DPPH自由基的清除，因此GDL組多糖表現(xiàn)出良好的自南基清除活性。聚糖鏈的構(gòu)象與其生物活性密切相關(guān)，GDL組及堿酶組多糖的抗氧化活性較好，也可能是其含有的三螺旋結(jié)構(gòu)對多糖活性產(chǎn)生影響。有研究表明，分子間氫鍵作用是三螺旋結(jié)構(gòu)剛性的主要動力。據(jù)報道，剛性三螺旋結(jié)構(gòu)具有抗腫瘤活性及免疫活性，三螺旋葡聚糖與其他生物活性問的關(guān)系還待進一步研究。
3 結(jié)語
不同蛋白質(zhì)脫除方式的多糖組分、結(jié)構(gòu)和抗氧化活性不同。TCA法脫蛋白效果最顯著，脫蛋白質(zhì)后多糖質(zhì)量分數(shù)提高至(74.83±0.27)％，蛋白質(zhì)脫除率為(86.36+1.01)％，但多糖抗氧化活性和總氨基酸含量最低，單糖組成簡單，不具有三螺旋結(jié)構(gòu)，適用于以于貝多糖結(jié)構(gòu)研究為目的的純化。GDL法脫蛋白質(zhì)的效果次于其他3種方式，脫蛋白質(zhì)后多糖質(zhì)量分數(shù)提高至(62.51±0.71)％，蛋白質(zhì)脫除率為(27.42±0.67)％，但綜合來看多糖抗氧化活性高于其他組多糖，總氨基酸質(zhì)量分數(shù)最高，單糖組成豐富，具有三螺旋結(jié)構(gòu)，該方法比較適合于獲取具有較好抗氧化活性的干貝多糖研究。堿酶法脫蛋白效果與稀堿法無顯著差別，但其總氨基酸含量高于稀堿組，單糖組成較稀堿組豐富，且具有三螺旋結(jié)構(gòu)，多糖活性高于稀堿組多糖，稍次于GDL組多糖。作者希望獲得高含量高活性的多糖組分，故選擇堿酶法脫蛋白質(zhì)。
相關(guān)鏈接：氨基酸，多糖，葡聚糖
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