基因疫苗對(duì)生物試劑的基因建發(fā)展起著很重要的意義,神話生物試劑網(wǎng)的疫苗小編就來為大家介紹一下基因疫苗質(zhì)粒載體的構(gòu)建。
獲得準(zhǔn)確的質(zhì)粒載體抗原編碼基因并將它插入到合適的載體dna上,是基因建發(fā)展基因疫苗的主要工作。
1、疫苗編碼抗原蛋白基因的質(zhì)粒載體分離
制備dna疫苗首先要獲得編碼抗原的基因,一般選擇編碼病原體表面糖蛋白的基因建基因??乖鞍桩a(chǎn)生后可在宿主體內(nèi)正確糖基化,疫苗從而誘導(dǎo)對(duì)病原體的質(zhì)粒載體免疫應(yīng)答反應(yīng);對(duì)于易變異的病原體,最好選擇各種變型都具有的基因建核心蛋白保守的dna序列,這樣可對(duì)各種變異的疫苗病原體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng),避免因病原體變異產(chǎn)生的質(zhì)粒載體免疫逃避問題。
2目的基因建基因質(zhì)粒的載體構(gòu)建
基因疫苗大多采用質(zhì)粒作載體。一般說來,疫苗基因疫苗質(zhì)粒載體至少包括5個(gè)主要的質(zhì)粒載體部件:
(1)細(xì)菌復(fù)制子,以便質(zhì)粒dna在細(xì)菌體內(nèi)復(fù)制擴(kuò)增,得到大量的拷貝,但不能在宿主細(xì)胞(真核細(xì)胞)中復(fù)制;
(2)原核生物選擇性標(biāo)記基因,如抗生素抗性基因,以篩選含有質(zhì)粒dna的陽性細(xì)菌克隆(菌株);
(3)真核生物的啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、終止子、內(nèi)含子等轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件;
(4)編碼抗原蛋白的目的基因序列;
(5)多聚核苷酸信號(hào)序列,以保證mrna翻譯時(shí)適時(shí)終止。另外,基因疫苗質(zhì)粒載體通常含有一段未甲基化的cpg序列,其具有刺激th1細(xì)胞的免疫活性。