基因疫苗對生物試劑的基因建發展起著很重要的意義,神話生物試劑網的疫苗小編就來為大家介紹一下基因疫苗質粒載體的構建。
獲得準確的質粒載體抗原編碼基因并將它插入到合適的載體dna上,是基因建發展基因疫苗的主要工作。
1、疫苗編碼抗原蛋白基因的質粒載體分離
制備dna疫苗首先要獲得編碼抗原的基因,一般選擇編碼病原體表面糖蛋白的基因建基因。抗原蛋白產生后可在宿主體內正確糖基化,疫苗從而誘導對病原體的質粒載體免疫應答反應;對于易變異的病原體,最好選擇各種變型都具有的基因建核心蛋白保守的dna序列,這樣可對各種變異的疫苗病原體產生免疫應答反應,避免因病原體變異產生的質粒載體免疫逃避問題。
2目的基因建基因質粒的載體構建
基因疫苗大多采用質粒作載體。一般說來,疫苗基因疫苗質粒載體至少包括5個主要的質粒載體部件:
(1)細菌復制子,以便質粒dna在細菌體內復制擴增,得到大量的拷貝,但不能在宿主細胞(真核細胞)中復制;
(2)原核生物選擇性標記基因,如抗生素抗性基因,以篩選含有質粒dna的陽性細菌克隆(菌株);
(3)真核生物的啟動子、增強子、終止子、內含子等轉錄調控元件;
(4)編碼抗原蛋白的目的基因序列;
(5)多聚核苷酸信號序列,以保證mrna翻譯時適時終止。另外,基因疫苗質粒載體通常含有一段未甲基化的cpg序列,其具有刺激th1細胞的免疫活性。