血清保存注意點
(1)需要長期保存的血清血清必須貯存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時日切勿超過1月.因為血清結(jié)冰時體積會增加約10%,所以,血清在凍入低溫冰箱,必須預留定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.
(2)一般廠商提供的血清無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)覺血清有懸浮物,則可將血清加入培育液內(nèi)一同過濾,切勿直接過濾血清.
(3)瓶裝血清解凍需采用逐漸解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移開門揖盜溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需時斷時續(xù)輕輕搖晃平勻(小心勿釀成氣泡),使溫度與成分均一,縮小積淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,樣因溫度改變太,簡單造成蛋白質(zhì)凝集自告奮勇現(xiàn)積淀.
(4)熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃平勻.此熱解決的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不倡議作此熱解決,因為熱解決會造成血清積淀物明顯增,而且還會影響血清的質(zhì)量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 加強吞噬作用, 增進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化.
(5)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得混濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量.
(6)血清中的積淀物
絮狀物:主角是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用解決.
顯微鏡下"小黑點":通過熱解決過的血清,積淀物的構(gòu)成會顯著增多.有些積淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤以為血清受污染.一般狀況下,此小黑點不會影響細胞生長,但假如疑心血清質(zhì)量,則應立刻停止運用,換另一批號的血清.
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積淀