蛋白質的結構和功能需要在合適的pH值環境中才能維持,因此在蛋白的生物制備及純化過程中,生物緩沖液的緩沖化中選擇非常重要,只有合適的液蛋緩沖液才能保證蛋白的活性和結構穩定。
蛋白純化過程緩沖液作用
用于蛋白純化的白純緩沖劑有很多種,在維持體系的生物pH同時,要保證蛋白在純化過程中不能失活,緩沖化中或者是液蛋盡量減少蛋白失活的量,在蛋白純化的白純每一個步驟中都要保持蛋白的可溶性和活性。
蛋白純化緩沖液要求
蛋白純化過程中的生物緩沖液既要防止蛋白降解,也要防止蛋白聚合,緩沖化中其對實驗結果影響顯著。液蛋在選擇和試ji緩沖液時應考慮以下幾個因素:pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩定劑。其中每一個因素都要根據所純化的目標蛋白進行優化,并以目標蛋白的活性作為優化的評估標準。
了解蛋白穩定性條件
蛋白的種類很多,不同的蛋白適應的pH值有差異,需根據其最適pH值來選擇緩沖液。很多時候采用的是pH是7.4,這是模仿的生物條件,大多數蛋白在這個pH值下是穩定的。不過也有一些是例外的,這就需要調整pH值,以保持蛋白是可溶的且不會降解。
蛋白純化常用的緩沖劑
蛋白純化過程中常用的緩沖液有Tris、Tricine、Bis-Tris、MOPS等,其中普遍的是用Tris,它的緩沖范圍接近生理pH值,且有著較低的離子強度,是蛋白質的良好溶劑,能保證蛋白的穩定性。需注意的是配制緩沖液時,盡量避開目標蛋白的等電點pl。因為蛋白在其等電點的pH溶液中表面沒有靜電荷,帶百分子間排斥力減小,容易聚集,溶解度降低。
現在需純化的蛋白的適應pH值、等電點、以及緩沖液的緩沖范圍都是可以查到的,直接按對應要求匹配即可。德晟是體外診斷試ji生產型企業,可提供大包裝的生物緩沖劑Tris、MOPS、Bicine等。